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PCR引物設(shè)計(jì)的一般原則是什么？
日期：2025-04-26 07:15
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摘要：
PCR引物設(shè)計(jì)的一般原則是什么？
1、引物長(zhǎng)度：15-30bp,一般為20bp左右。
2、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物結(jié)構(gòu)：避免引物3’端出現(xiàn)互補(bǔ)序列及二級(jí)結(jié)構(gòu)，3’端的堿基特別是*末及倒數(shù)第2個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)。
4、引物中酶切位點(diǎn)一般加在5’端，合適的酶切位點(diǎn)便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的酶切分析或分子克隆。
5、引物濃度：每條引物濃度0....
PCR引物設(shè)計(jì)的一般原則是什么？
1、引物長(zhǎng)度：15-30bp,一般為20bp左右。
2、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物結(jié)構(gòu)：避免引物3’端出現(xiàn)互補(bǔ)序列及二級(jí)結(jié)構(gòu)，3’端的堿基特別是*末及倒數(shù)第2個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)。
4、引物中酶切位點(diǎn)一般加在5’端，合適的酶切位點(diǎn)便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的酶切分析或分子克隆。
5、引物濃度：每條引物濃度0.1-1umol或10-100pmol，以*低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物間二聚體的形成機(jī)會(huì)。