ELISA包被和封閉的原理：

實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要將抗原或捕獲抗體包被于固相載體上，通過檢測分子（酶或熒光基團(tuán)），將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，以OD值或發(fā)光值的結(jié)果，對(duì)靶蛋白進(jìn)行定量分析。

ELISA 中的固相載體物很多，常用的是聚苯乙烯，具有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)吸附性。具有可制成各種形式，且不參與化學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯，它質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。除塑料制品外，固相酶免 疫測定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜；另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的。

在 ELISA 中，抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵。ELISA 所用抗原有三個(gè)來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化。重組抗原和多肽抗原均為人工合成品，使用安 全，而且純度高，干擾少的優(yōu)勢(shì)。但制備的技術(shù)難度較大，制備成本高。

將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。因?yàn)檩d體的物質(zhì)不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯 ELISA 板為載體時(shí)，需將抗原或抗體溶于緩沖液中，加于 ELISA 板孔中在 4℃ 過夜。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，后產(chǎn)生非特異性顯色，導(dǎo)致本底值偏高。在這種情況下，需要在包被后用牛血清白蛋白再包被一次，消除干擾，這一過程也被稱為封閉。

通常包被和封閉都是在生產(chǎn)時(shí)由廠家完成的，只需要知道原理即可，實(shí)驗(yàn)時(shí)無需操作。