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細(xì)胞凍存的步驟
日期：2025-04-24 08:43
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摘要：
細(xì)胞凍存的步驟：
1、配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。
3、去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長的細(xì)胞消化下來;
4、離心 1000rpm，5min;
5、去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的zui 終密度為 5×106/ml~1×107/ml;
6、將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;
7、在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作...
細(xì)胞凍存的步驟：
1、配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。
3、去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長的細(xì)胞消化下來;
4、離心 1000rpm，5min;
5、去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的zui 終密度為 5×106/ml~1×107/ml;
6、將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;
7、在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者;
8、凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。