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PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對(duì)方法
日期：2025-04-24 05:06
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摘要：
PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對(duì)方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。
2. 內(nèi)切酶法：選擇識(shí)別4個(gè)堿基的內(nèi)切酶（如MspI和TaqI等），可同時(shí)選擇幾種，以克服用一種酶只能識(shí)別特定序列的缺陷，室溫作用1h后加熱滅活進(jìn)行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射，注意事項(xiàng)與方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶...
PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對(duì)方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。
2. 內(nèi)切酶法：選擇識(shí)別4個(gè)堿基的內(nèi)切酶（如MspI和TaqI等），可同時(shí)選擇幾種，以克服用一種酶只能識(shí)別特定序列的缺陷，室溫作用1h后加熱滅活進(jìn)行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射，注意事項(xiàng)與方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，使PCR產(chǎn)物中摻入大量dU。在再次進(jìn)行PCR擴(kuò)增前，用UNG處理PCR混合液即可消除PCR產(chǎn)物的殘留污染。由于UNG在PCR循環(huán)中的變性一步便可被滅活，因此不會(huì)影響含dU的新的PCR產(chǎn)物。
總之，靈敏度越高的PCR反應(yīng)越容易出現(xiàn)PCR污染。采用適當(dāng)?shù)拇胧┫廴?，可以避免重?fù)實(shí)驗(yàn)和浪費(fèi)試劑，也使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠而精準(zhǔn)。